外泌体的来源与特征
外泌体(exosome)是一种存在于细胞外的多囊泡体，通过细胞内吞泡膜向内凹陷形成，其大小均一，直径为40-100 nm，密度为1.10-1.18 g/ml。
外泌体可由间充质干细胞、淋巴细胞和细胞等多种类型细胞主动分泌释放。外泌体内主要含有、蛋白质和脂质等，可作为疾病诊断标记物、调控靶细胞功能、参与细胞生物学活动等。
例如：含有mir-140-5p的滑膜间充质干细胞来源外泌体(smsc-exo)可影响软骨组织再生；骨髓间充质干细胞来源外泌体携带的mir-196a可调节成骨细胞分化促进大鼠颅骨缺损的骨再生。
外泌体的提取方法
间充质干细胞来源的外泌体应用到各个领域中，大量实验也围绕它而展开。其中分离高质量的外泌体成为研究的关键步骤。
目前外泌体的分离方法也各式各样。每一种方法都优势与局限性：我们对市面上常见的几种方法做了对比：
目前尚且没有一种方法能够完全满足需求，既保持外泌体的完整性、高产量和纯度，同时还有对外泌体质量的控制。相信随着科学研究的深入发展，外泌体作为一种新的研究工具，开启研究应用领域的新篇章。
外泌体的临床应用
间充质干细胞是目前最广泛使用的细胞类型，它具有自我更新，多向分化、分泌细胞因子和细胞外囊泡体、免疫调节、来源广泛等特点，在的临床治疗中取得了良好的成果。
间充质干细胞来源外泌体与间充质干细胞有着相似的功能，包括修复与再生组织、抑制炎症反应及调节机体免疫，但外泌体相对于间充质干细胞又有许多优势。
首先，间充质干细胞来源外泌体更稳定，更好保存，易于管理和控制，可以人为改变其内容物的种类和数量。
其次，它们没有活细胞，不会像间充质干细胞那样可能会过多增殖而放大或者癌变导致疾病加重；另外，它有可能避免某些针对间充质干细胞的调控问题，间充质干细胞来源外泌体有代替间充质干细胞的趋势。
外泌体的科研思路
对外泌体进行提取以后，通常对外泌体进行，方法为：电镜扫描和western blot，wb中的常见指标有cd9, cd63, tsg 101，后续科研思路比较广泛，其中外泌体内含rna表达谱研究二代测序的研究是热门的科学研究方向，下图为常见的科研思路的整理图：
外泌体纯化产品
外泌体分离纯化
| 分离方法 | 产品编号 | 产品名称 | 处理样本体积 |
| 超滤法 | 28932237 | vivaspin 500/6/20超滤管 | 500 ul-20 ul |
| ufc500396 | amicon ultra 超滤管-3 kda | 0.5-15 ml | |
| ufc510096 | amicon ultra 超滤管-100 kda | 0.5-15 ml | |
| 柱膜层析法 | 76064 | exoeasy maxi kit (20) | 4ml-16ml |
| exosome isolation kit pan, human | ea | ||
| k1237 | exopure? isolation kit (cell media) | 2，10t | |
| 沉淀法 | 76603 | mircury exosome serum/plasma kit | 16/50t |
| m1001 | exopure? reagent(overall exosome isolation) | 25/50t | |
| 免疫磁珠法 | nbp2-49826 | 0.4 micron immunobeads for overall e ... | 0.4um磁珠 |
| m1030 | exopure? 0.4 micron immunobeads (overall exosome isolation, cell media, 10 reactions) | 1ml磁珠 |
外泌体rna提取与检测
| 产品编号 | 产品名称 | 产品简介 |
| 77164 | exorneasy maxi kit (50) | 外泌体内rna提取 |
| 77144 | exorneasy midi kit (50) | 外泌体内rna提取 |
| 77023 | exorneasy serum/plasma starter kit (20) | 外泌体内rna提取 |
| 76603 | mircury exosome serum/plasma kit | 外泌体内rna提取 |
| 76743 | mircury exosome cell/urine/csf kit | 外泌体内rna提取 |
| 77900 | reagent ui (1 ml) | 尿液配套试剂 |
| 218160 | mi ii rt kit (12) | 逆转录试剂 |
| 218300 | mi primer assay (100) | 引物 |
| 218073 | mi sybr green pcr kit (200) | pcr试剂 |
| 219610 | mirneasy serum/plasma spike-in control | 血清血浆样本内参质控 |
| 330401 | rt first strand kit (12) | 逆转录试剂 |
| varies | rt sybr green mastermix(2) | pcr试剂 |
| 330701 | rt lncrna qpcr assay(200) | pcr试剂 |
| 330001 | rt qpcr primer assay (200) | 引物 |
| 331053 | mi single cell qpcr kit | 含有细胞裂解，cdna合成和对mirna进行扩增所需的所有试剂，可实现单细胞mirna表达分析 |
| 331502 | qiaseq mirna library kit | 该试剂盒将umi整合到逆转录过程中，通过ngs实现对成熟mirna的无偏和准确的mirnome定量 |
| 333180 | qiaseq fastselect邃? rna removal kit | 用于rna-seq文库制备的快速rrna和/或珠蛋白mrna去除 |
25分钟获得完整囊泡
提高下游检测灵敏度 – 可处理高达4 ml 血清或血浆, 32 ml 细胞培养液
高特异性，高纯度– 亲和膜技术，无需沉淀或超速离心
下游使用洗脱液应用领域
最终洗脱液buffer xe的确切成分是专有的。为确保与生物学应用兼容，buffer xe无菌生产，分试样也可以冷冻保存以防止微生物生长。
对于目标细胞吸收分离的外泌体引起生物学反应的实验，exoeasy洗脱液可以直接稀释到细胞培养基中，或者首先进行缓冲液交换步骤，见下文
当将5％的洗脱液buffer xe添加到在dmem中培养的hela细胞（在2.5 ml培养基中125μl）中培养长达24小时时，未观察到细胞形态，密度或活力的变化（台盼蓝染色）。每当将缓冲液xe中的囊泡直接添加到细胞中时，强烈建议仅使用洗脱液buffer xe进行模拟控制。
对于需要更浓缩的囊泡制剂或特定缓冲液条件的应用，可以使用超滤来减少洗脱液体积和更换缓冲液条件。分子量为100 kda或以下的sartoriusvivaspin®500和vivaspin 2（例如，sartorius目录号vs0141或vs02x1）已根据制造商的建议成功使用。
